Février 2007 - n°6
Le laboratoire de cryobiologie du Centre
Régional de Transfusion Sanguine de Casablanca
La cryobiologie consiste en
la congélation et la cryopréservation des systèmes
biologiques (cellules, tissus…). Il en résulte un blocage
total et homogène de tous les systèmes enzymatiques, ce
qui permet de sauvegarder leurs propriétés fonctionnelles
et donc leur utilisation à distance du prélèvement.
Le laboratoire de cryobiologie de Casablanca a pour objectifs le traitement
et la conservation des cellules souches hématopoïétiques
pour la greffe de moelle osseuse et la constitution d’une banque
de tissus (vaisseaux, os…). Il est composé de deux zones
:
1. Zone de préparation et de traitement :
L’entrée de cette zone se fait par un sas réservé
au personnel et aux fournitures. Cette zone est alimentée en
air entièrement filtré, elle est constituée de
3 salles classées :
- La salle de réception et de décongélation, classée
100.000 c’est-à-dire ayant moins de 500 microorganismes
par mètre cube.
- La salle de préparation classée 10.000 (<100 microorganismes/m3)
- La salle de congélation classée 10.000 (<100 microorganismes/m3)
L’alimentation en air filtré maintient en toute circonstance
une pression positive par rapport aux zones de moindre sécurité.
2. Zone de stockage : Cette zone est de taille suffisante et adaptée
aux modalités de conservation et aux équipements utilisés
pour permettre un stockage ordonné et séparé des
différentes catégories de produits. Le stockage des cellules
souches se fait en azote liquide à -196°C, alors que la conservation
des greffons osseux, par exemple, se fait à -80°C.
Le Centre Régional de Transfusion de Casablanca a financé
la construction et l’équipement de ces différentes
structures.
Matériel et équipement
Dans le cadre de la collaboration avec l’Etablissement Français
du Sang d’Aquitaine-Limousin, ce dernier a fait don au CRTS de
Casablanca d’un séparateur de cellules CS 3000 plus (pour
le prélèvement des cellules souches du sang périphérique).
De plus, un autre don de la Caisse Nationale de Sécurité
Sociale, de 3.000.000 DH, a permis l’acquisition d’un certain
nombre de matériels (pour le traitement, le stockage et le contrôle
de la qualité) :
- Hotte à flux laminaire
- Centrifugeuse de poches
- Congélateur programmable à -196°C
- Soudeuses de poches
- Cuves de stockage des poches en azote liquide
- Cuves de stockage des tubes en azote liquide
- Récipients ravitailleurs en azote liquide
- Laveur de cellules en circuit fermé
- Congélateur à -80°C
- Bain marie
- Centrifugeuse de paillasse
- Cytomètre de flux
- Incubateur à CO2
Greffe de cellules souches hématopoïétiques
Cette opération permet la reconstitution des populations cellulaires
du sang (globules rouges, globules blancs et plaquettes). Cette reconstitution
est indispensable à la survie des patients qui souffrent d’un
déficit congénial ou acquis en cellules d’origine
médullaire. Dans le cas d’affections telles que les leucémies
aiguës ou chroniques, voire d’autres cancers non hématologiques
(sein, ovaire,…), il est souvent fait usage de traitements intensifs
dont le but est de réduire les cellules anormales caractéristiques
de la maladies. Cependant, ces traitements puissants détruisent
également les cellules normales, notamment les cellules sanguines
et médullaires. Une greffe de cellules souches est indispensable
pour permettre aux patients de reconstituer les cellules hématopoïétiques
normales de la moelle.
la greffe de cellules souches hématopoïétiques est
destinée aux malades atteints de leucémies aiguës,
leucémies myéloïdes chroniques, myélome multiple,
lymphomes malins non hodgkiniens, maladie de hodgkin, neuroblastome
stade IV, cancers du sein, cancers de cellules germinales ou encore
de sarcomes des tissus mous.
Le laboratoire de cryobiologie assure le prélèvement (qui
se fait dans l’unité d’hémaphérèse
du Centre de Transfusion Sanguine de Casablanca, à l’aide
de séparateurs de cellules, la congélation, la décongélation
et le lavage des cellules souches en vue d’une réinjection
ultérieure dans des conditions stériles.
Toutes les manipulations doivent se faire sous hotte à flux laminaire
dans le respect des règles d’asepsie.
Après chaque étape de prélèvement, de traitement
avant congélation et après décongélation,
des prélèvements sont faits sur les cellules souches pour
les tests de contrôle de qualité (numération des
CD34+, numération formule sanguine,études bactériologique
et mise en culture des Colony Forming Unit (CFU) afin de tester la fonction
cellulaire).
Banques de tissus
La banque de tissus va permettre la cryoconservation de :
• Fragments osseux volumineux (banque d’os): os entiers,
épiphyses complètes, fragments volumineux de diaphyse.
Les greffons sont mis, sous hotte à flux laminaire, dans des
poches stériles en téflon ; ces dernière sont ensuite
soudées puis mises à congeler dans un congélateur
électrique à -80°C
Avant congélation, différents prélèvement
sont réalisés sur les greffons pour les différentes
analyses (bactériologie, anatomopathologie,…)
Les greffons sont, dans un premier temps, mis en stock provisoire en
attente des résultats de l’étude sérologique
virale HIV, HBS, HCV,…), de bactériologie et d’anatomopathologie.
Quand les résultats d’analyses sont conformes, les greffons
osseux sont irradiés, puis mis en stock définitif à
80°C.
La décongélation se fait dans un bainmarie à 37°C
ou à température ambiante dans la salle d’opération.
• Greffons vasculaires (banque de vaisseaux) : veines, artères
et valves cardiaques.
Les prélèvements sont pratiqués en salle d’opération
avec le respect le plus strict des règles d’asepsie. Ils
sont ensuite placés dans des pots stériles (Cryokit) contenant
une solution d’antibiotiques. Un prélèvement de
tissu et des prélèvements sanguins accompagnent les greffons
vasculaires, et l’ensemble est acheminé vers le laboratoire
de cryobiologie dans un délai inférieur à 24 heures.
Au niveau du laboratoire de cryobiologie, les greffons subissent différentes
étapes de traitement en vue de leur conservation dans des conditions
de stérilité et de viabilité optimales.
La décongélation et le lavage des greffons se font au
bloc opératoire par un technicien du laboratoire de cryobiologie
qui les remet directement au chirurgien, lequel procède immédiatement
à la greffe.
La banque de tissus permet d’éviter les éventuelles
complications liées au prélèvement d’autogreffe
sur l’opéré et rend possible des greffes chez des
personnes qui n’auraient pas pu en bénéficier du
fait de l’impossibilité de prélèvement chez
eux. Les malades marocains auront ainsi à leur disposition des
greffons osseux et vasculaires.
Intérêts de la mise en place
d’un tel laboratoire au Maroc :
- Survie et qualité de vie des malades :
la greffe de cellules souches augmente les chances de guérison.
Le service d’hématologie de Casablanca accueille annuellement
près de 50 à 80 nouveaux cas de lymphomes malins non hodgkiniens,
20 à 30 cas de maladie de kahler, 80 à 100 cas de leucémie,
40 à 60 cas de maladie de Hodgkin. 15 à 30% de ces malades
relèvent de la greffe de moelle osseuse. En dehors de l’hématologie,
d’autres patients souffrant de cancers variés devraient
bénéficier de la greffe de moelle osseuse (cancer du sein…)
- Une économie importante de devises :
certains malades sont régulièrement adressés dans
des centres de greffes étrangers, le coût varie de 50.000
à 150.000 Euros selon qu’il s’agit d’une autogreffe
ou d’une allogreffe de moelle osseuse. Ce coût peut être
réduit de 50 à 60% si la greffe est réalisée
localement.
- Transfert de technologie et du savoir-faire :
la décision de création d’un laboratoire de cryobiologie
a permis la formation de spécialistes dans les techniques de
prélèvement des cellules souches et d’un docteur
en biologie dans les techniques de cryobiologie et de contrôle
de qualité par cytométrie de flux et culture cellulaire.
Cette formation a eu lieu à l’Etablissement Français
du Sang Aquitaine Limousin, dans le cadre de la coopération Franco-Marocaine
en transfusion sanguine. Ce laboratoire va permettre dorénavant
la formation de spécialistes.
Le laboratoire de cryobiologie met ainsi à disposition des malades
marocains des moyens pour un traitement de qualité et augmente
les chances de leur guérison.
K.BERRAMOU